13.1 PhÐp thö histamin

Dïng chuét lang nÆng 250 - 350 g. §Ó chuét nhÞn ®ãi trong 24 giê, vÉn cho uèng n­íc theo nhu cÇu cña chuét. GiÕt chuét ®ét ngét b»ng ph­¬ng ph¸p thÝch hîp.

Mæ bông chuét, dïng kÑp, kÑp vµo manh trµng, n©ng lªn vµ kÐo ra phÝa tr­íc, sÏ thÊy håi trµng nèi vµo manh trµng. C¾t lÊy mét ®o¹n håi trµng dµi kho¶ng 2 cm, cho vµo khay ®ùng dung dÞch B (nÕu lµm chËm ph¶i sôc khÝ carbogen). Lo¹i bá c¸c chÊt cßn trong ®o¹n ruét b»ng c¸ch dïng mét pipet cã dung dÞch B lång vµo ®Çu ®o¹n ruét råi ®Ó cho dung dÞch B trong pipet ch¶y tù nhiªn qua ®o¹n ruét. CÇn ®Ó pipet ë t­ thÕ nghiªng sao cho mÆt tho¸ng cña dung dÞch B kh«ng cao qu¸ 2 cm so víi ®o¹n ruét trong khay.

Thay dung dÞch B míi vµo khay. Buéc vµo mçi ®Çu cña ®o¹n ruét mét sîi chØ m¶nh vµ r¹ch mét ®­êng ngang nhá ë gi÷a ®o¹n ruét.

Cho ®o¹n ruét vµo b×nh nu«i c¬ quan c« lËp cã dung tÝch 10 - 20 ml, chøa dung dÞch B, vµ gi÷ ë nhiÖt ®é h»ng ®Þnh 34 - 36oC. Sôc mét hçn hîp khÝ cã 95 thÓ tÝch oxygen vµ 5 thÓ tÝch carbon dioxyd qua b×nh nu«i. Mét ®Çu sîi chØ buéc vµo gÇn ®¸y b×nh nu«i, ®Çu kia nèi víi ®Çu ghi cña mét kimograph  hoÆc thiÕt bÞ thÝch hîp ®Ó ghi sù co bãp cña ruét. NÕu dïng bót ghi trªn giÊy th× ®iÒu chØnh sao cho biªn ®é cã thÓ khuÕch ®¹i lªn kho¶ng 20 lÇn. Søc c¨ng cña ruét nªn vµo kho¶ng 9,8 mN vµ ®iÒu chØnh theo ®é nh¹y cña ruét.

Thay dung dÞch B trong b×nh nu«i c¬ quan. §Ó yªn 10 phót. TiÕp tôc thay dung dÞch B  2 - 3 lÇn nh­ vËy n÷a.

Thªm vµo b×nh nu«i c¬ quan, chÝnh x¸c kho¶ng 0,2 - 0,5 ml dung dÞch histamin dihydroclorid cã nång ®é nhÊt ®Þnh ®Ó g©y nªn mét ®¸p øng gÇn tèi ®a cã thÓ lÆp l¹i ®­îc. LiÒu nµy gäi lµ liÒu "cao".

Thay dung dÞch B ë b×nh nu«i 3 lÇn tr­íc mçi lÇn thªm histamin. Nªn thªm histamin vµo nh÷ng kho¶ng thêi gian c¸ch ®Òu ®Ó ruét gi·n hoµn toµn  gi÷a c¸c lÇn thªm (kho¶ng 2 phót).

T­¬ng tù, thªm nh÷ng thÓ tÝch b»ng nhau cña dung dÞch cã nång ®é histamin thÊp ®Ó cho ®¸p øng cã biªn ®é b»ng kho¶ng mét nöa biªn ®é cña liÒu "cao" vµ cã thÓ lÆp l¹i ®­îc. LiÒu nµy gäi lµ liÒu "thÊp".

TiÕp tôc thªm ®Òu ®Æn c¸c liÒu "cao" vµ liÒu "thÊp" histamin nh­ ®· nªu ë trªn vµ xen kÏ thªm cïng mét thÓ tÝch dung dÞch pha tõ mÉu thö. §iÒu chØnh ®é pha lo·ng cña dung dÞch thö ®Ó cho søc co cña ruét nhá h¬n søc co cña liÒu "cao".

KiÓm tra xem søc co cña dung dÞch thö cã lÆp l¹i kh«ng vµ xem ®¸p øng víi liÒu cao vµ liÒu thÊp cã nh­ tr­íc kh«ng.

TÝnh ho¹t lùc cña chÊt thö ra microgam histamin base c¨n cø vµo ®é pha lo·ng ®· x¸c ®Þnh ë trªn. L­îng histamin x¸c ®Þnh ®­îc kh«ng ®­îc v­ît qu¸ l­îng ghi trong chuyªn luËn.

NÕu chÊt thö kh«ng g©y co bãp ruét, pha mét dung dÞch kh¸c vµ cho thªm mét l­îng histamin tèi ®a dung n¹p ®­îc ghi trong chuyªn luËn vµ thö víi dung dÞch nµy. Theo dâi xem sù co c¬ cña dung dÞch nµy cã t­¬ng øng víi l­îng histamin ®· thªm kh«ng. NÕu dung dÞch nµy kh«ng g©y ra sù co c¬ t­¬ng øng hoÆc sù co cña dung dÞch thö kh«ng lÆp l¹i ®­îc, hoÆc sau khi thö chÊt thö råi, thö l¹i víi histamin chuÈn liÒu "cao" vµ liÒu "thÊp" mµ ®¸p øng co gi¶m ®i th× kÕt qu¶ thö lµ kh«ng cã gi¸ trÞ vµ ph¶i thö chÊt h¹ ¸p cña thuèc theo chuyªn luËn "PhÐp thö  c¸c chÊt h¹ ¸p".

Dung dÞch A:

Natri clorid                                    160 g

Kali clorid                                     4,0 g

Calci clorid khan                           2,0 g

Magnesi clorid khan                      1,0 g        

Dinatri hydrophosphat                  50 mg

N­íc cÊt pha tiªm                 võa ®ñ 1000 ml

Dung dÞch B:

Dung dÞch A                                    50 ml      

Atropin sulfat                                 0,5 mg

Natri hydrocarbonat                      1,0 g       

D - glucose                                      0,5 g

N­íc cÊt pha tiªm                  võa ®ñ 1000 ml

Dung dÞch B ph¶i pha ngay tr­íc khi dïng vµ ph¶i dïng trong vßng 24 giê.